HPLC en zuiverheid: hoe puurheid wordt gemeten

Wat HPLC is

HPLC staat voor high-performance liquid chromatography. Het is een laboratoriummethode die de verschillende stoffen in een monster van elkaar scheidt. Zodra ze gescheiden zijn, kan elke stof worden gemeten. HPLC is een van de meest gebruikte manieren om de zuiverheid van een peptide te controleren.

Hoe een HPLC-meting werkt

Het monster wordt opgelost en door een lange buis met fijn materiaal geduwd, de kolom genoemd. Verschillende stoffen bewegen met verschillende snelheden door de kolom. Een detector aan het einde registreert elke stof zodra die eruit komt. Het resultaat is een grafiek met pieken. Elke piek staat voor één stof, en de grootte laat zien hoeveel ervan aanwezig is.

Hoe zuiverheid wordt berekend

Zuiverheid wordt bepaald door de pieken te vergelijken. Het oppervlak van de hoofdpiek wordt vergeleken met het totale oppervlak van alle pieken. Als de hoofdpiek X procent van het totaal beslaat, wordt de zuiverheid als X procent gerapporteerd. De overige (100 − X) procent bestaat uit andere stoffen in het monster.

Wat een zuiverheidspercentage wel en niet zegt

Een zuiverheidspercentage vertelt het aandeel van de gewenste stof ten opzichte van andere stoffen die de methode kan zien. Het bevestigt op zichzelf niet de identiteit van de stof. Het meet ook niet wat de methode niet kan detecteren. Voor de identiteit voegt een lab vaak massaspectrometrie toe.

HPLC op een certificaat van analyse

Het HPLC-resultaat staat meestal op het certificaat van analyse, of CoA. Het CoA vermeldt de gemeten zuiverheid en bevat vaak ook de grafiek. Door het CoA te lezen ziet u de gerapporteerde zuiverheid en hoe die is gemeten.