HPLC i czystość: jak mierzy się czystość

Czym jest HPLC

HPLC oznacza high-performance liquid chromatography, czyli wysokosprawną chromatografię cieczową. Jest to metoda laboratoryjna, która rozdziela różne substancje w próbce. Po rozdzieleniu każdą substancję można zmierzyć. HPLC to jedna z najczęściej stosowanych metod sprawdzania czystości peptydu.

Jak działa pomiar HPLC

Próbkę rozpuszcza się i przepycha przez długą rurkę wypełnioną drobnym materiałem, zwaną kolumną. Różne substancje przemieszczają się przez kolumnę z różną prędkością. Detektor na końcu rejestruje każdą substancję, gdy ta wypływa. Wynikiem jest wykres z pikami. Każdy pik odpowiada jednej substancji, a jego wielkość pokazuje, ile jej jest.

Jak oblicza się czystość

Czystość wyznacza się przez porównanie pików. Pole powierzchni głównego piku porównuje się z łącznym polem wszystkich pików. Jeśli główny pik stanowi X procent całości, czystość podaje się jako X procent. Pozostałe (100 − X) procent to inne substancje w próbce.

Co procent czystości mówi, a czego nie

Procent czystości mówi o udziale substancji docelowej w porównaniu z innymi substancjami, które metoda potrafi zobaczyć. Sam w sobie nie potwierdza tożsamości substancji. Nie mierzy też tego, czego metoda nie jest w stanie wykryć. Aby ustalić tożsamość, laboratorium często dodaje spektrometrię mas.

HPLC na certyfikacie analizy

Wynik HPLC znajduje się zwykle na certyfikacie analizy, czyli CoA. CoA podaje zmierzoną czystość i często zawiera także wykres. Czytając CoA, widzi się podaną czystość oraz sposób jej pomiaru.