La HPLC et la pureté : comment la pureté est mesurée

Ce qu'est la HPLC

HPLC signifie high-performance liquid chromatography. C'est une méthode de laboratoire qui sépare les différentes substances d'un échantillon. Une fois séparée, chaque substance peut être mesurée. La HPLC est l'un des moyens les plus courants de contrôler la pureté d'un peptide.

Comment fonctionne une mesure HPLC

L'échantillon est dissous puis poussé à travers un long tube rempli d'un matériau fin, appelé la colonne. Les différentes substances se déplacent dans la colonne à des vitesses différentes. Un détecteur situé à l'extrémité enregistre chaque substance à sa sortie. Le résultat est un graphique avec des pics. Chaque pic représente une substance, et sa taille indique la quantité présente.

Comment la pureté est calculée

La pureté est déterminée en comparant les pics. L'aire du pic principal est comparée à l'aire totale de tous les pics. Si le pic principal représente X pour cent de l'aire totale, la pureté est rapportée à X pour cent. Les (100 − X) pour cent restants sont constitués d'autres substances présentes dans l'échantillon.

Ce qu'un pourcentage de pureté indique et n'indique pas

Un pourcentage de pureté indique la part de la substance recherchée par rapport aux autres substances que la méthode peut voir. Il ne confirme pas à lui seul l'identité de la substance. Il ne mesure pas non plus ce que la méthode n'est pas conçue pour détecter. Pour l'identité, un laboratoire ajoute souvent la spectrométrie de masse.

La HPLC sur un certificat d'analyse

Le résultat HPLC figure généralement sur le certificat d'analyse, ou CoA. Le CoA indique la pureté mesurée et comprend souvent le graphique. La lecture du CoA vous permet de voir la pureté rapportée et la façon dont elle a été mesurée.