HPLC e purezza: come si misura la purezza

Che cos'è l'HPLC

HPLC sta per high-performance liquid chromatography. È un metodo di laboratorio che separa le diverse sostanze presenti in un campione. Una volta separate, ogni sostanza può essere misurata. L'HPLC è uno dei modi più comuni per verificare la purezza di un peptide.

Come funziona una misurazione HPLC

Il campione viene sciolto e spinto attraverso un lungo tubo riempito di materiale fine, chiamato colonna. Le diverse sostanze si muovono nella colonna a velocità diverse. Un rilevatore all'estremità registra ogni sostanza man mano che esce. Il risultato è un grafico con dei picchi. Ogni picco rappresenta una sostanza, e la sua dimensione riflette quanta ne è presente.

Come si calcola la purezza

La purezza si determina confrontando i picchi. L'area del picco principale viene confrontata con l'area totale di tutti i picchi. Se il picco principale costituisce il X percento dell'area totale, la purezza viene riportata come X percento. Il restante (100 − X) percento è costituito da altre sostanze presenti nel campione.

Che cosa dice e non dice una percentuale di purezza

Una percentuale di purezza indica la quota della sostanza desiderata rispetto alle altre sostanze che il metodo è in grado di vedere. Da sola non conferma l'identità della sostanza. Non misura nemmeno ciò che il metodo non è predisposto a rilevare. Per l'identità, un laboratorio aggiunge spesso la spettrometria di massa.

L'HPLC su un certificato di analisi

Il risultato HPLC compare di solito sul certificato di analisi, o CoA. Il CoA riporta la purezza misurata e spesso include anche il grafico. Leggere il CoA permette di vedere la purezza riportata e come è stata misurata.