HPLC y pureza: cómo se mide la pureza

Qué es la HPLC

HPLC significa high-performance liquid chromatography. Es un método de laboratorio que separa las distintas sustancias de una muestra. Una vez separadas, cada sustancia se puede medir. La HPLC es una de las formas más habituales de comprobar la pureza de un péptido.

Cómo funciona una medición por HPLC

La muestra se disuelve y se impulsa a través de un tubo largo relleno de material fino, llamado columna. Las distintas sustancias se mueven por la columna a velocidades diferentes. Un detector al final registra cada sustancia a medida que sale. El resultado es un gráfico con picos. Cada pico representa una sustancia, y su tamaño refleja cuánto hay presente.

Cómo se calcula la pureza

La pureza se determina comparando los picos. El área del pico principal se compara con el área total de todos los picos. Si el pico principal constituye el X por ciento del área total, la pureza se informa como X por ciento. El (100 − X) por ciento restante corresponde a otras sustancias de la muestra.

Qué indica y qué no indica un porcentaje de pureza

Un porcentaje de pureza indica la proporción de la sustancia deseada en comparación con otras sustancias que el método puede ver. Por sí solo no confirma la identidad de la sustancia. Tampoco mide lo que el método no está preparado para detectar. Para la identidad, un laboratorio suele añadir la espectrometría de masas.

La HPLC en un certificado de análisis

El resultado de la HPLC suele figurar en el certificado de análisis, o CoA. El CoA indica la pureza medida y a menudo incluye también el gráfico. Leer el CoA le permite ver la pureza informada y cómo se midió.