Cómo leer un CoA y un cromatograma

Qué es un certificado de análisis (CoA)

Un certificado de análisis, abreviado CoA, es un documento analítico vinculado a un lote específico de una sustancia que presenta los resultados de las pruebas de laboratorio. Un CoA para un péptido suele contener al menos dos tipos de análisis: un análisis de HPLC para determinar la pureza y un análisis de espectrometría de masas (MS) para confirmar el peso molecular. El documento también suele indicar el número de lote, la fecha del análisis y el método analítico utilizado.

Leer el cromatograma: tiempo de retención y pico principal

Un cromatograma de HPLC muestra el tiempo, expresado en minutos, en el eje horizontal, y la intensidad de la señal medida por el detector en el eje vertical. Cuando una sustancia fluye a través de la columna, alcanza el detector tras un tiempo de retención específico, característico de esa sustancia bajo las condiciones analíticas utilizadas. Esto produce un pico en el cromatograma. El pico más grande, que ocupa la mayor parte del área, se denomina pico principal y representa el componente principal de la muestra.

Porcentaje de área y picos secundarios

Además del pico principal, pueden aparecer picos más pequeños en otros tiempos de retención. Estos picos secundarios representan sustancias relacionadas o impurezas presentes en concentraciones más bajas. El software calcula el área de cada pico y la expresa como porcentaje del área total de todos los picos combinados. Este porcentaje de área del pico principal es el porcentaje de pureza que se indica en un CoA. Cuanto más pequeños y menos numerosos sean los picos secundarios, más alto será el porcentaje de pureza declarado.

Espectrometría de masas: confirmación del peso molecular

Además del análisis de HPLC, un CoA completo incluye un resultado de espectrometría de masas. En esta técnica, las moléculas se ionizan y se separan según su relación masa carga. El resultado es un peso molecular medido, que se compara con el peso molecular calculado teóricamente para la secuencia peptídica prevista. Una coincidencia entre la masa medida y la esperada confirma la identidad de la sustancia. Sin esta confirmación mediante MS, un resultado de HPLC solo ofrece información sobre la pureza, no sobre si el componente principal corresponde realmente a la secuencia peptídica prevista.

Evaluar un CoA en la práctica

Al evaluar un CoA, es importante comprobar si el número de lote corresponde a la sustancia recibida, si están presentes tanto un resultado de HPLC como uno de MS, y si el tiempo de retención y el peso molecular declarados son coherentes con la sustancia prevista. Un cromatograma con un único pico principal nítido y picos secundarios mínimos, junto con un resultado de MS que coincide con el peso molecular esperado, constituyen en conjunto la base de un análisis bien documentado.